گروه:
گروه پژوهشی دام، طیور و آبزیان
تاریخ شروع:
1393
تاریخ خاتمه:
1396
وضعیت:
خاتمه یافته
محل تامین اعتبار:
صندوق حمایت از پژوهشگران و فناوران کشور
بودجه طرح:
250000000
هدف از این مطالعه بهینهسازی روشهای مختلف انتقال ژن به گوسفند بود. برای این منظور پس از بهینهسازی تولید رویان آزمایشگاهی، کشت و انجماد سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی و انجماد اسپرم، روشهای انتقال ژن به اسپرم، بیضه و سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی و انتقال ژن بواسطه سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج انتقال ژن به اسپرم نشان داد در حدود 20 درصد از اسپرمهای حاصل از ناحیه اپیدیدیم بیضه گوسفند قادر به جذب DNA خارجی با استفاده از حامل توربوفکت بودند. اسپرمهای ناحیه اپیدیدم قابلیت انتقال ژن به تخمکهای بالغ را نداشتند و استفاده از تکنیک انتقال ژن بواسطه بیضه، در صورت تزریق کمپلکس توربوفکت– DNA به ناحیه اپیدیدیم بیضه قوچ، قابلیت انتقال ژن به جنس ماده را پس از جفت گیری نخواهد داشت. نتایج حاصل از ترانسفکشن سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی نشان داد حامل X-tremeGENE HP در مقایسه با توربوفکت و یا لیپوفکتامین 2000 قابلیت بیشتری جهت ترانسفکت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی دارد. بطوری که تا 70 درصد از سلولها توسط این حامل ترانسفکت شدند در حالی که این مقدار برای توربوفکت و لیپوفکتامین به ترتیب حدود 40 و 30 درصد بود. استفاده ترکیبی از ویتامینهای ای و ث زندهمانی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی ترانسفکت را پس از انجماد و یخگشایی افزایش داد. به منظور آماده سازی بره گیرنده سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی ترانسفکت از تیمارهای سرما، گرما و بوسولفان استفاده شد. تیمارهای سرما و گرما باعث کاهش معنیدار سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی شدند اما این سلولها بطور کامل از بین نرفتند. تیمار بوسولفان بدلیل ایجاد عوارض جانبی بصورت تزریق وریدی و یا درون حفره شکمی در گوسفند توصیه نمیگردد. پیشنهاد میشود برای این منظور از تیمارهای سرما و گرما بصورت ترکیبی و همچنین تزریق بوسولفان زیر پوشش اسکورتوم بیضه در مطالعات آینده استفاده گردد.
نوع کارفرما:
سایر(صندوق حمایت از پژوهشگران،فناوران و ...)
درصد مشارکت کارفرما:
100%