گروه:
گروه پژوهشی دام، طیور و آبزیان
همکاران پژوهشکده:
دکتر محمدرضا سنجابي
ناظر طرح (داخل پژوهشکده):
دکتر سارا میرزائی
تاریخ شروع:
1396
تاریخ خاتمه:
1397
وضعیت:
خاتمه یافته
محل تامین اعتبار:
پلیس مبارزه با مواد مخدر
بودجه طرح:
250000000
یکی از روشهای رایج به منظور كشف مواد مخدر استفاده از سگهاي آموزش ديده میباشد. سگهای مواد یاب موجود در کشور وارداتی میباشند و در صورت جفت گیری با نژادهای دیگر ژنوتیپ نتاج حاصله تغییر خواهد کرد و توانایی والدین خود را نخواهند داشت. در این صورت میتوان از فناوریهای تولید مثلی مانند شبیه سازی به منظور تکثیر
سگهای مواد یاب استفاده نمود. هدف از این مطالعه ایجاد بانک سلولی از 10 قلاده سگ مواد یاب زبده پلیس مبارزه با مواد مخدر ناجا از نژاد بلژین شپرد بود. برای این منظور نمونه های پوست سگ ها از ناحیه پشت گوش یا کشاله ران با انجام بیهوشی در مرکز نگهداری سگهای پلیس ناجا (سپکا) تهیه شد. سپس در آزمایشگاه سلولهای بنیادی سازمان پژوهشهای علمی و صنعتی ایران از سلولهای اپیدرم کشت اولیه به عمل آمد. به منظور کشت سلولها از محیط کشت DMEM حاوی پنی سیلین و استرپتومایسین (%1) و FBS (%15) استفاده شد. پس از کشت اولیه، از سلولهایی که در پاساژ سوم و در مرحله رشد لگاریتمی بودند به منظور انجام آزمایشات و تشکیل بانک سلولی استفاده شد. احتمال آلودگی به مایکوپلاسما از یکی از سه روش کشت در محیطهای میکروبی اختصاصی، روش PCR و نیز رنگ آمیزی دنا با رنگ فلوروکروم اختصاصی و مشاهده با میکروسکوپ فلورسنت بررسی شد. انجماد سلولهای فیبروبلاست به روش انجماد آهسته انجام شد و محیط انجماد شامل DMSO (%10)، FBS (%80) و DMEM (%10) بود. اثر غلظتهای 5، 10، 25، 50 و 100 میکروگرم بر میلی لیتر از ویتامین های C و E به تنهایی و در ترکیب با یکدیگر روی انجماد
سلولهای فیبروبلاست مورد بررسی قرار گرفت بطوری که سلولها پس از یک ماه از انجماد در دمای 196- درجه سانتیگراد دوباره یخ گشایی شدند و زنده مانی آنها با روش تریپان بلو و MTT مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که سلولهای مورد مطالعه با موفقیت فرآیند انجماد و یخ گشایی را سپری نمودند و اختلاف معنی داری در زنده مانی آنها بین شاهد و غلظتهای مختلف از ویتامینهای C وE مشاهده نشد (05/0 < P). همچنین در نمونههای مورد مطالعه آلودگی به مایکوپلاسما مشاهده نشد. در نتیجه اجرای این طرح از 10 قلاده سگ مواد یاب زبده پلیس مبارزه با مواد مخدر ناجا بانک سلولی تشکیل شد بطوری که علاوه بر حفظ ذخایر ژنتیکی سگهای مواد یاب، امکان انجام تحقیقات و ارایه خدمات به سایر مراکز و دانشگاههای کشور فراهم شده است.
سگهای مواد یاب استفاده نمود. هدف از این مطالعه ایجاد بانک سلولی از 10 قلاده سگ مواد یاب زبده پلیس مبارزه با مواد مخدر ناجا از نژاد بلژین شپرد بود. برای این منظور نمونه های پوست سگ ها از ناحیه پشت گوش یا کشاله ران با انجام بیهوشی در مرکز نگهداری سگهای پلیس ناجا (سپکا) تهیه شد. سپس در آزمایشگاه سلولهای بنیادی سازمان پژوهشهای علمی و صنعتی ایران از سلولهای اپیدرم کشت اولیه به عمل آمد. به منظور کشت سلولها از محیط کشت DMEM حاوی پنی سیلین و استرپتومایسین (%1) و FBS (%15) استفاده شد. پس از کشت اولیه، از سلولهایی که در پاساژ سوم و در مرحله رشد لگاریتمی بودند به منظور انجام آزمایشات و تشکیل بانک سلولی استفاده شد. احتمال آلودگی به مایکوپلاسما از یکی از سه روش کشت در محیطهای میکروبی اختصاصی، روش PCR و نیز رنگ آمیزی دنا با رنگ فلوروکروم اختصاصی و مشاهده با میکروسکوپ فلورسنت بررسی شد. انجماد سلولهای فیبروبلاست به روش انجماد آهسته انجام شد و محیط انجماد شامل DMSO (%10)، FBS (%80) و DMEM (%10) بود. اثر غلظتهای 5، 10، 25، 50 و 100 میکروگرم بر میلی لیتر از ویتامین های C و E به تنهایی و در ترکیب با یکدیگر روی انجماد
سلولهای فیبروبلاست مورد بررسی قرار گرفت بطوری که سلولها پس از یک ماه از انجماد در دمای 196- درجه سانتیگراد دوباره یخ گشایی شدند و زنده مانی آنها با روش تریپان بلو و MTT مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که سلولهای مورد مطالعه با موفقیت فرآیند انجماد و یخ گشایی را سپری نمودند و اختلاف معنی داری در زنده مانی آنها بین شاهد و غلظتهای مختلف از ویتامینهای C وE مشاهده نشد (05/0 < P). همچنین در نمونههای مورد مطالعه آلودگی به مایکوپلاسما مشاهده نشد. در نتیجه اجرای این طرح از 10 قلاده سگ مواد یاب زبده پلیس مبارزه با مواد مخدر ناجا بانک سلولی تشکیل شد بطوری که علاوه بر حفظ ذخایر ژنتیکی سگهای مواد یاب، امکان انجام تحقیقات و ارایه خدمات به سایر مراکز و دانشگاههای کشور فراهم شده است.
نوع کارفرما:
صنعت/مشارکت سازمان و صنعت
نام کارفرما:
پلیس مبارزه با مواد مخدر
درصد مشارکت کارفرما:
100%